ELISA-testi havaitsee lukuisia sairauksia, minkä vuoksi sitä on käytetty laajasti lääketieteessä ja muussa. ELISA-testi tunnetaan kuitenkin parhaiten Lyme-taudin diagnoosista. Mikä on ELISA-testi? Kuinka tuloksia tulkitaan? Mikä on testin hinta?
Sisällysluettelo:
- ELISA-testi - mitä se havaitsee? ELISA-testin soveltaminen
- ELISA-testi - mikä on testi?
- ELISA-testi ja Lyme-tauti - milloin suorittaa?
- ELISA-testi - hinta. Paljonko ELISA-testi maksaa?
- ELISA-testi - tulokset. Voivatko ne olla vääriä positiivisia?
- ELISA-testi - tulokset. Voivatko ne olla vääriä negatiivisia?
ELISA-testi, ts. Entsyymiin liittyvä immunosorbenttimääritys, on yleisesti käytetty laboratoriomenetelmä, joka palvelee mm. veren vasta-aineiden kvantitatiiviseen havaitsemiseen.
Tästä syystä ELISA-testiä on käytetty bakteerisairauksien, kuten Lyme-borrelioosin, diagnosoinnissa.
ELISA-menetelmän etuna on sen yksinkertaisuus ja mahdollisuus nopeaan käyttöönottoon sekä korkea herkkyys. ELISA-menetelmä suoritetaan käyttämällä erityisiä muovilevyjä, joiden kuopat on täytetty esim. Borrelia-proteiineilla (antigeeneillä) ja spesifisillä monoklonaalisilla vasta-aineilla, jotka on suunniteltu havaitsemaan vasta-aineet potilaan näytteessä.
ELISA-testi - mitä se havaitsee? ELISA-testin soveltaminen
ELISA-menetelmän korkea herkkyys ja yksinkertaisuus tekivät sen sovellettavaksi monien sairauksien diagnosoinnissa, mutta se tunnetaan parhaiten Lyme-taudin diagnoosimenetelmänä.
Lyme-borrelioosin diagnoosin yhteydessä ns epäsuora ELISA, jonka avulla voidaan havaita spesifinen IgM tai IgG testatussa materiaalissa. Samalla tavalla vasta-aineet voidaan havaita diagnoosia varten:
- virusinfektiot: herpesvirukset (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, sytomegalovirus), HIV, hepatiittivirukset (HBV ja HCV)
- alkueläininfektiot: toksoplasmoosi, giardiaasi
- autoimmuunisairaudet: keliakia (anti-tTG- tai anti-DPG-vasta-aineet), Hashimoton tauti (anti-TG- ja anti-TPO-vasta-aineet), tulehdukselliset suolistosairaudet (anti-ASCA- ja anti-ANCA-vasta-aineet)
- loissairaudet ja allergiat, joissa havaitaan spesifisiä IgE-vasta-aineita. Niiden kohonnut taso voi viitata allergioihin, esimerkiksi siitepölyyn ja ruokaan, tai loisten hyökkäykseen (aseistettu lapamato, ihmisen pyöreä mato)
ELISA-menetelmään (niin kutsuttu sandwich-ELISA) on myös muutoksia, jotka mahdollistavat muiden proteiinien kuin vasta-aineiden näytteen havaitsemisen. Sitten testin tarkoituksena on havaita biologisesta materiaalista:
- virusten tai bakteerien fragmentit, useimmiten ne ovat tietylle patogeenille ominaisia antigeenejä
- seerumin hormonit, esim. estrogeeni, prolaktiini, TSH, fT4, kortisoli
- entsyymit, esim. kalprotektiini, haiman elastaasi, alkalinen fosfataasi
- kasvainmarkkerit, esim. CA-125
- lääkkeiden läsnäolo seerumissa
Tätä menetelmää voidaan soveltaa myös elintarviketeollisuudessa, jossa se voi havaita allergeenien (esim. Maito, maapähkinät), muuntogeenisten organismien tai toksiinien pitoisuuden ruoassa.
ELISA-testi - mistä on kyse?
Esimerkiksi Lyme-borrelioosin diagnoosi ELISA-menetelmällä koostuu immuuniproteiinien havaitsemisesta biologisessa materiaalissa - vasta-aineissa, joita syntyy Borrelia-antigeenejä vastaan saadun vasteen aikana.
Vasta-aineet testataan kahdessa luokassa, IgM ja IgG. IgM: t ovat ensimmäisiä vasta-aineita, jotka ilmestyvät elimistöön joutuessaan kosketuksiin bakteerien kanssa, ja ne vähenevät ajan myötä.
Heidän asemansa ovat pysyvämmät IgG-vasta-aineet, jotka voivat pysyä kehossa useita kymmeniä vuosia.
Tällä tavalla bakteerien läsnäolo kehossa testataan epäsuorasti havaitsemalla vasta-aineita, jotka on suunnattu erityisesti Borrelia spirochetes -bakteereja vastaan.
Infektion eri vaiheissa olevat vasta-aineet voivat olla suunnattu erilaisia Borrelia-proteiineja vastaan. Esimerkiksi varhaisessa vaiheessa se on p41-proteiini.
Myöhemmissä vaiheissa alkaa ilmestyä yhä enemmän proteiineja, kuten p21, p30, p39, p43. Siksi Lymen taudin diagnosointi on erittäin vaikeaa.
Bakteeriproteiinien valinta on erittäin tärkeää, jotta testillä olisi korkea diagnostinen arvo. Siksi rutiininomaisesti Lymen taudin diagnosoinnissa tulisi käyttää II- tai III-sukupolven ELISA-testejä, joissa valitaan proteiinisarjat luotettavimman tuloksen saavuttamiseksi.
ELISA-testi ja Lymen tauti. Milloin tehdä?
Lyme-borrelioosi on bakteerisairaus, jonka aiheuttavat Borrelia burgdorferi -bakteerit ja sen monet lajikkeet.
Taudin diagnoosi ei ole yksinkertainen johtuen Borreliaa vastaan tapahtuvan immuunivasteen monimutkaisuudesta ja laboratoriomenetelmien puutteista.
Yleisimmin käytetty laboratoriomenetelmä on erittäin herkkä ELISA-menetelmä, joka havaitsee bakteeriproteiineja vastaan kasvatetut spesifiset vasta-aineet.
Lymen taudin diagnosoinnissa käytetään epäsuoraa ELISA-menetelmää, jossa erotetaan seuraavat vaiheet:
- levyllä olevien kuoppien inkubointi potilaalta kerätyn materiaalin, esim. seerumin kanssa. Jos testatussa materiaalissa on vasta-aineita Borreliaa vastaan, ne sitoutuvat reaktiokuopan pohjassa oleviin proteiineihin
- sitten ylimääräinen seerumi huuhdellaan erityisellä pesunesteellä (puskuri) ja ns konjugaatti, joka on entsyymiin sitoutunut vasta-aine, joka sitoutuu aiemmin kytkettyihin vasta-aineisiin reaktiokuopissa
- sitten konjugaatin substraatti lisätään ja tapahtuu värireaktio (positiivinen tulos) tai ei värireaktiota (negatiivinen tulos)
- viimeinen vaihe on lukijan lukema (spektrofotometri) Borrelia-vasta-aineiden pitoisuudesta potilaan seerumissa
Lyme-taudin ELISA-testi suoritetaan verestä ja neurologisten oireiden (neuroborrelioosi) tapauksessa myös aivo-selkäydinnesteestä.
Nivelnestettä ei tule testata, koska väärän positiivisen tuloksen todennäköisyys on suuri.
Taudin diagnosoinnin perustana ovat sitä osoittavat kliiniset oireet, jotka laboratoriotestit osoittavat.
Laboratoriotestituloksen lisääminen ilman oireita ei oikeuta Lymen taudin diagnosointia, koska on osoitettu, että Borrelia-vasta-aineita havaitaan myös terveillä ihmisillä.
Lyme-borrelioosin serologinen diagnoosi alkaa puolikvantitatiivisella seulontatutkimuksella. Jos tulos on negatiivinen, se tarkoittaa, että Borrelia-spiroheetoja ei ole havaittu tai tulos on väärä negatiivinen.
Jos tulos on positiivinen tai heikosti positiivinen (epäselvä), on suoritettava vahvistava Western blot -testi, jolle on tunnusomaista korkea spesifisyys.
Tämä vahvistaa saatujen ELISA-tulosten "totuudenmukaisuuden". Diagnoosin aikana et voi ohittaa mitään edellä mainituista vaiheista ja esimerkiksi suorittaa diagnoosi välittömästi Western blot -menetelmällä tai tehdä diagnoosi yksinomaan positiivisen ELISA-tuloksen perusteella.
Puolassa Lymen taudin diagnoosi päättyy usein ensimmäisessä seulontavaiheessa, mikä aiheuttaa positiivisten tai heikosti positiivisten tulosten väärän tulkinnan.
Suositeltava artikkeli:
Lymfosyyttien transformaatiotesti (LTT) Hyvä tietääELISA-testi - hinta. Paljonko ELISA-testi maksaa?
Testi maksaa noin 60 zlotya ja se tehdään heti. Voit kuitenkin odottaa noin kolme kuukautta viittauksen tuloksia.
ELISA-testi - tulokset. Voivatko ne olla vääriä positiivisia?
Vääriä positiivisia tuloksia saadaan IgM-vasta-aineiden ristireaktiivisuudesta muiden proteiinien kanssa. Kehon tuottamat vasta-aineet voivat 'väärin' tunnistaa muiden mikro-organismien antigeenin Borrelia-antigeeniksi.
Yleisimmät "virheet" tapahtuvat treponema pallidumin, herpesvirusten ja ihmisillä, joilla on systeeminen lupus erythematosus ja muut reumaattiset sairaudet.
ELISA-testi - tulokset. Voivatko ne olla vääriä negatiivisia?
Väärät negatiiviset tulokset voivat ilmetä infektion varhaisessa vaiheessa, jolloin testi tulisi toistaa noin 3-4 viikon kuluttua. Tätä kutsutaan serologinen ikkuna, se on infektion alkuvaihe, jossa elimistö ei ole vielä "onnistunut" tuottamaan spesifisiä vasta-aineita.
Samoin ihmisillä, joilla on immuunipuutos, jotka eivät tuota tarpeeksi vasta-aineita.
Suuri ongelma, varsinkin erittäin voimakkaissa infektioissa, on ns immuunikompleksit, jotka koostuvat Borrelia spirochetes -antigeeneistä ja heille spesifisistä vasta-aineista.
Tämän seurauksena vasta-aineista tulee "näkymättömiä" yleisesti käytetyille menetelmille, kuten ELISA, ja vaikka niitä esiintyy testatussa materiaalissa, niitä ei voida havaita.
Tällaisissa tapauksissa laboratorio voi käyttää immuunikompleksien hajottamista. Tämä hoito on suunniteltu vapauttamaan vasta-aineita. Tätä menetelmää ei kuitenkaan käytetä laajalti, koska laboratorioissa ei ole standardointia.
Tietämisen arvoinenMiksi Lymen taudin diagnosointi ei ole helppoa?
Tämä johtuu Borrelia-immuunivasteen monimutkaisuudesta ja laboratoriomenetelmien rajoituksista. Lajikkeiden moninaisuus ja uusien infektioiden syntyminen etenkin Euroopan mantereella eivät edistä tehokkaiden diagnostisten menetelmien kehittämistä.
Viime aikoina Euroopassa on esiintynyt enemmän lajikkeita, kuten Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana ja Borrelia spielmanii. Lisäksi kehossa Borrelia-spirokeetit voivat muuttua kysteiksi tai pysyä kehon paikoissa, joihin immuunijärjestelmän solut eivät pääse.
Siksi "näkymätön" immuunijärjestelmälle. Lisäksi on osoitettu, että kudokset voivat sisältää bakteerifragmentteja, joilla on voimakkaasti tulehdusta edistäviä ominaisuuksia. Heidän uskotaan olevan vastuussa Lyme-taudin kroonisista oireista huolimatta negatiivisista laboratoriotestituloksista.
Kirjallisuus
1. Witecka-Knysz E. et ai. Lymen tauti: miksi diagnoosi on niin vaikeaa? Laboratoriodiagnostiikka huhtikuu 2007.
2. Moore A. et ai. Nykyiset ohjeet, yhteiset kliiniset karhut ja tulevat ohjeet Lymen taudin laboratoriodiagnoosiin, Yhdysvallat. Emergency Infect Dis. 2016 heinäkuu; 22 (7).
3. Punkkiin tarttuvien tautien laboratoriodiagnostiikka. Työryhmän suositukset: Kansallinen laboratoriodiagnostiikkakamari, Kansallinen kansanterveyslaitos - Kansallinen hygieniainstituutti, tartuntatautien kansallinen konsultti, Tartuntatautien ja neuroinfektioiden osasto, Białystokin lääketieteellinen yliopisto, Puolan virologiayhdistys, Varsova 2014
4. Hosseini S. et ai .: Entsyymiin liittyvä immunosorbenttimääritys (ELISA) A: sta Z. Springeriin 2017.
